Рясковые - как биоиндикаторы  

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ИНДИКАЦИЯ
(назначение, подходы и методы исследований)

Общие закономерности поведения загрязнителей (пестициды, регуляторы роста, нитриты, нитраты, нитрозамины, ТМ) в отдельных компонентах агроценоза (почве, растениях, воде, атмосфере), достаточно хорошо изучены. Вместе с тем, последствия комплексного воздействия поллютантов на биоценозы и фитопопуляцию в реально встречающихся концентрациях исследованы недостаточно. Остатки агрохимикатов в почве и растениях вступают в сложные взаимодействия различного характера, включая антагонизм, синергизм, аддитивность. Вот почему смеси поллютантов обычно не подчиняются закономерностям, установленным для индивидуальных веществ в искусственных условиях на моделях (Методич. и организ. основы, 1991). Например, широко используемые азотные удобрения могут изменять темп поступления и скорость разложения в растении ряда гербицидов. При комплексном применении пестицидов может замедляться темп их исчезновения из почвы и растений. (Мирцухалова Ц.Е., 1990-1991)

Преимущества биоиндикации

Для получения объективной картины загрязнения агроценоза необходимы исследования в двух направлениях. Во-первых, должны совершенствоваться методы инструментального химического анализа, во-вторых, целесообразно более широкое использование биоиндикаторов.

Применение организмов, реагирующих на загрязнение среды обитания изменением визуальных признаков, имеет ряд преимуществ. Оно позволяет существенно сократить или даже исключить применение дорогостоящих и трудоемких физико-химических методов анализа. Биоиндикаторы интегрируют биологически значимые эффекты загрязнения. Они позволяют определять скорость происходящих изменений, пути и места скопления в экосистемах различных токсикантов, делать выводы о степени опасности для человека и полезной биоты конкретных веществ или их сочетаний (В.А.Вронский, 1996; В.Е.Соколов и др., 1990; М.С.Соколов и др., 1994; Энциклопед.словарь.,1993).

Типы чувствительности биоиндикаторов

В зависимости от скорости проявления биоиндикаторных реакций выделяют несколько различных типов чувствительности тест-организмов:

  • I тип - биоиндикатор проявляет внезапную и сильную реакцию, продолжающуюся некоторое время, после чего перестает реагировать на загрязнитель.
  • II тип - биоиндикатор в течении длительного времени линейно реагирует на воздействие возрастающей концентрации загрязнителя.
  • III тип - после немедленной, сильной реакции у биоиндикатора наблюдается ее затухание, сначала резкое, затем постепенное.
  • IV тип - под влиянием загрязнителя реакция биоиндикатора постепенно становится все более интенсивной, однако достигнув максимума постепенно затухает.
  • V тип - реакция и типы неоднократно повторяются, возникает осцилляция биоиндикаторных параметров (Биоиндикация наземных экосистем, 1988).

Для экотоксикологического картирования агроландшафта можно использовать биоиндикаторы, аккумулирующие загрязнители по безбарьерному типу, т.е. прямо-пропорционально их концентрации во внешней среде. Например, покровные ткани растений (кора) и животных (шерсть) представляются малоактивными индикаторами для этого метода. Листья, цветки и другие органы растений накапливают поллютанты по фонобарьерному типу (Научные основы мониторинга...,1992). Подобные органы и ткани приемлемы для биотестирования загрязнения почв, вод и атмосферы. (Гераськин С.А., 1993; Использование методов биоиндикации, 1990; Соколов М.С. и др., 1999)

Стандарты сравнения при биоиндикации

При проведении биоиндикации существенную роль играет выбор стандартов для сравнения. Последние делятся на две группы: абсолютные и относительные.

Абсолютные стандарты

В группу абсолютных стандартов входят (Биоиндик.загряз.назем...,1988):

  1. системы свободные от воздействия поллютантов;
  2. системы с искусственным исключением действия антропогенных факторов;
  3. системы слабо или вовсе не подверженные действию антропогенных факторов;
  4. градиенты изменения функций объекта, вплоть до пренебрежимо малого времени воздействия. (Жукова Т.В. и др., 1999)
Относительные стандарты

Группа относительных стандартов сравнения базируется на :

  1. корреляции с пространственно-временными изменениями антропогенных факторов среды;
  2. выявлении эталонных объектов, испытывающих незначительное или изначально известное антропогенное воздействие. (Крюков В.И., 1999; Соколов М.С. и др. 1998)

Требования к биоиндикаторам

Для объективной оценки загрязнения агроценоза ксенобиотиками необходимы адекватные тест-системы и фитотесты, реагирующие на комплекс загрязнителей и пригодные для выявления мутагенного потенциала встречающихся в агросфере поллютантов. При этом индикаторы должны удовлетворять ряду требований:

  1. накопление загрязняющих веществ не должно приводить к гибели тест-организмов;
  2. численность тест-организмов должна быть достаточной для отбора, т.е. без влияния на их воспроизводство;
  3. в случае долгосрочных наблюдений предпочтительны многолетние виды флоры ;
  4. фитотесты должны быть генетически однородными;
  5. должна быть обеспечена легкость взятия проб;
  6. должна реализоваться относительная быстрота проведения тестирования;
  7. биотесты должны обеспечивать получение достаточно точных и воспроизводимых результатов;
  8. биоиндикаторы должны быть одновозрастными и характеризоваться, по-возможности, близкими свойствами;
  9. диапазон погрешностей измерений( по сравнению с классическими или эталонными методами тестирования) не должен превышать 20-30%;
  10. при выборе тест-организмов предпочтение следует отдавать регистрации функциональных, этологических, цитогенетических изменений отдельных индикаторных процессов биоты, а не только изменению ее структуры , численности или биомассы, т.к. эти последние являются более консервативными (К.С.Бурдин, 1985; Биоиндикация заг.наз.экосистем.,1988; Научные основ.монит.земель., 1992; Н.П.Дубинин, Ю.В.Пашин, 1978; В.Г.Минеев и др.,1991; М.С.Соколов, В.И.Терехов, 1994; Т.М. Умылина, 1989).

При биоиндикации агроценоза необходимо учитывать и тератогенный эффект загрязнителей, т.е. способность вызывать у тест-организмов различные пороки развития (Э.И.Слепян, 1979). Последствия действия тератогенных загрязнителей различны: в одних случаях тератогенез может охватывать лишь клеточные органеллы, отдельные клетки: в других - затрагивает ткани, органы и весь организм. Поэтому следует учитывать подобные изменения с помощью известных тест-систем, а также отрабатывать новые методы биоиндикации тератогенного действия загрязнителей .

Требования к биоиндикаторам агроценоза

Биоиндикация загрязненности агроценоза должна, по-возможности, включать три направления исследований:

  • подбор индикаторов прогнозирования раннего воздействия;
  • прогнозирование состояния биотических компонентов агроценоза;
  • диагностику состояния агроценоза в целом (К.С.Бурдин,1985; Ю.Л. Злобин , Б.М. Миркин, 1992).

Биоценозы, как правило, состоят из популяций нескольких видов и включают элементы двух категорий (виды и популяции), разнонаправленно реагирующие на воздействие загрязнителей. Поэтому ранняя диагностика и прогнозирование негативных изменений на биоценотическом уровне являются наиболее сложными вопросами (В.Н.Лысцов, О.Г.Скотникова,1991; D.Wicklum, W.Daries,1995).

Особенности биоиндикации агроценоза

На методы биоиндикации, предназначенные для раннего тестирования агроценоза накладываются определенные ограничения. Агроценоз - это совокупность совместно обитающих искусственно созданных и естественных видов организмов и условий их существования, находящихся в тесной взаимосвязи как друг с другом, так и со специфическими для отдельных агроценозов абиотическими и биотическими условиями (Методич. и организац. основы.., 1991). Однако эталонные ( природные) биоценозы, например, заповедники зачастую сами испытывают пресс различных антропогенных нагрузок, изменяющих естественное состояние их биотической составляющей. Все это обусловливает сложность оценки состояния экосистемы в целом и реакции ее биоты на клеточном, организменном и популяционном уровнях на фоне сходных изменений даже при близких природно-климатических условиях. По этим причинам биоиндикаторы, как отдельные естественные элементы экосистемы, и следовательно, сама биоиндикация, лишь частично решают проблему объективности оценки состояния агроценозов, в плане констатации и анализа происходящих с ними изменений (М.Г.Шандала и др.,1992; М.А. Нечкина, В.С. Журков, 1997).

Возможно, методы оценки состояния разных типов экосистем потребуют специфичных биоиндикаторов. Так, например, для оценки состояния биоты вследствие загрязнения атмосферного воздуха, широко применяются методы лихенометрии ( использование лишайников). Для санитарного контроля и нормирования загрязнителей в педоценозах успешно применяются методы микробиологического тестирования. Они включают вирусологические, бактерологические исследования и метод определения "токсикоза" почв (А.П.Левич,1994; Е.И.Гончарук, Г.И.Сидоренко,1986; Е.Н.Мишустин и др.,1979; Ю.В.Круглов, 1991).

Биоиндикация как инструмент для проведения экологического контроля за состоянием агроэкосистемы, может входить в систему экологического нормирования, методической основой которого является биотестирование. Поэтому система биотестирования должна быть достаточно гибкой, т.к. норма реакции для каждого агроценоза будет индивидуальной (Г.А. Кириллова и др., 1992; В.Н.Лысцов, О.Г.Скотникова,1991).

Для осуществления биомониторинга за состоянием агроценоза (который предполагает существование причинной связи между уровнем воздействия на биоту и ее откликом на загрязнитель), необходимо располагать методами ступенчатой биоиндикации. Поскольку ни один, даже самый информативный биотест не может дать полной информации об изменениях всех компонентов агроценоза, необходима система взаимоперекрывающихся тестов (А.П.Левич,1994). С этой целью она должна включать как простые (вирусы, бактерии, грибы), так и высокоорганизованные виды биоты ( растения , позвоночные животные).

Сферы применения биоиндикации

Наиболее важными сферами применения биоиндикации могут быть следующие:

  1. выявление естественного буферного потенциала агроценоза и допустимых нагрузок экзогенных веществ при различных технологиях возделывания сельскохозяйственных культур;
  2. контроль за состоянием фитопопуляции с целью ранней диагностики и предотвращения отрицательных последствий поллютантов, которые могут повлиять на структуру и функции биоты, продуктивность агроценоза, а также на здоровье человека;
  3. комплексная система экологического мониторинга агросферы, включая обнаружение негативных изменений, их диагностику на самой ранней стадии антропогенного воздействия. (Биоиндикация загрязнения наз.экосистем..., 1988; М.С.Соколов, В.И.Терехов, 1994; Г.И. Рожнов и др., 1998)
  4. сохранение биоразнообразия агроландшафта, позволяющее обеспечить существование как можно большего числа организмов, в особенности редких видов биоты, высокочувствительных к загрязнению. (В.Н. Пухальская, 1998)

Средства и методы биоиндикации

Специальные биотесты для определения загрязнения фитопопуляции солями тяжелых металлов , остатками пестицидов, микотоксинами и другими агентами сводятся к оценке степени изменения морфометрических, физиологических и биохимических показателей биоты. Подобные нарушения проявляются в изменении энергии прорастания, всхожести семян, размеров корней, в повреждении растений под воздействием загрязнителей. Рассмотрим некоторые из них на примере различных организмов.

Биотесты на бактериях

Для тестирования остатков пестицидов, ТМ в почве и воде используется стандартный микробиотест. Он позволяет определить эффект суммарного присутствия всех токсикантов и токсическое действие широкого круга загрязнителей. Метод основан на получении водной почвенной вытяжки и количественной оценки в ней токсикантов по степени ингибирования одной из ключевых ферментных систем - люцеферазой, что количественно регистрируется биолюминаметром типа БЛМ 8101. В питательную среду на основе водной вытяжки (почва/вода - 1/10) высевают культуру Photobacrterium phosphoreum. Этим способом анализируются остатки пестицидов (ФОС, ХОП), нитриты и ТМ (Р.А.Пшеничников и др., 1995). В санитарно-эпидемиологических исследованиях наряду с прямым определением содержания патогенных микроорганизмов, также применяются методы индикаторных штаммов (или "почвенной закладки") и определения "токсикоза" почв. При этом в качестве тест-объектов используют Clostridium tetani,Cl.perfringens, Bacillus anthracis, Escherichia coli и др. Сущность метода "почвенной закладки" заключается в оценке соотношения вегетативных и споровых форм биоиндикаторов в стерильной и нативной почве. Степень токсичности ("токсикоза") почв определяют по проценту пророста индикаторных бактериальных штаммов, т.е. по отношеннию образовавшихся колоний к количеству посевов. Показатель токсичности рассчитывается как величина обратная проросту. Токсичность почвы ранжируется по восьми классам опасности (А.П.Левич,1994; Е.Н.Мишустин и др.,1979).

Биотесты на водорослях

Классическим тест-объектом на загрязнители является одноклеточная зеленая водоросль хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer.). Ее преимущества для экспресс-анализа загрязнения агроценоза заключаются в коротком жизненном цикле и возможности проводить оценку по таким показателям, как пигментное секторирование, нарушение споруляции клеток и летальность.

Метод, основанный на оценке численности живых особей и динамики ее фитомассы, дает в конечном счете представление о влиянии токсикантов на продолжительность жизни и плодовитость тест-системы. Существует альгологическая оценка фитотоксичности гербицидов (метод "бумажных дисков"). Оценивается интенсивность роста биоиндикатора Ch.vulgaris в зависимости от концентраций токсиканта. За альгицидные принимают концентрации вещества полностью подавляющие рост водорослей на дисках (Ю.В.Круглов, 1991). Другой метод оценки химических веществ, основанный на эффекте замедленной флюоресценции (ЗФ). Этот эффект проявляется у растений при наличии сформированного фотосинтетического аппарата. Гербициды (ингибиторы фотосинтеза) способны изменять интенсивность ЗФ. Под действием очень низких концентраций гербицида резко ингибируется ЗФ, что регистрируется на специальной установке. Этим способом можно выявить наличие гербицидов ингибиторов реакций Хилла, однако в случае других пестицидов метод малоэффективен (Р.А.Пшеничников и др.,1995; M.I.Ribo, K.Z.Kaiser, 1987).

Многие методы биологического тестирования основаны на визуальных оценках. Весьма пригодны для этой цели зеленые и диатомовые водоросли. Под действием токсикантов первоначально зеленая масса водоросли меняет цвет - становится густо-коричневой или наоборот, обесцвечивается. Некоторые токсиканты не вызывают заметных изменений окраски, однако водоросли теряют тургор и легко повреждаются (P.K.Mohapatra, R.C.Mohanty,1992; F.Gunneberg,1992.).

Существуют достаточно надежные способы количественной регистрации воздействия загрязнителей, например, плазмолиз. Для определения количества погибших клеток пользуются методом витального окрашивания. Живые клетки сильно ограничивают проникновение в протоплазму органических веществ, и будучи помещенными в раствор ряда красителей, практически не окрашиваются. В мертвые клетки краска проникает свободно, благодаря чему наличие погибших клеток легко поддается учету.

Система тестов, фиксирующих изменения каких-либо функций организма, основана на скорости движения протоплазмы, которая у многих клеток способна совершать круговые движения (циклозис). Реакция замедления или остановки протоплазмы лучше всего заметна на растениях с удлиненными клетками, такими как харовые водоросли (Charophyta), дюнамилла (Dunamilla) и элодея (Elodea). Присутствие свинца в среде, например, влияет на скорость движения протоплазмы, начиная с концентрации 0,5мг/мл (С.Г.Галактионов, В.М.Юдин, 1980).

Для тестирования почвы, загрязненной ТМ используют тест учета биологического разнообразия водорослей на единицу площади. При малейшем загрязнении почвы, первыми из водорослевых сообществ "выбиваются" зеленые водоросли. Желто-зеленые водоросли, особенно одноклеточные, являются показателями чистоты и здоровья почвы. Их исчезновение становится сигналом на загрязнение. Однако, почвенные водоросли, как индикаторы, имеют ограничения: зачастую обеднение структуры альгопедоценоза указывает на степень общего загрязнения, без дифференцировки отдельных контаминантов (Э.А.Штина, 1990; B.A.Whitton, 1984).

Биотесты на мхах

Метод индукции флюоресценции хлорофилла позволил исследовать активность фотосинтетического аппарата у ряда растений при изменении внешних условий среды. Эта особенность хлорофилла была предложена в качестве индикаторного признака нарушений, вызванных воздействием поллютантов. Удобным объектом для исследований послужил листовой мох Mnium hotnum L., у которого хорошо просматривается однослойная структура гаметофита. Модулируемое (путем переключения световых и темновых фаз) развитие флюоресценции суспензии хлоропластов служит критерием степени загрязнения воздуха двуокисью серы (Э.А.Штина, 1990). Предложенный метод лег в основу тест-системы, определяющей загрязнение воды ТМ с помощью высших растений - ряски малой (Lemna minor L.).

Биотесты на лишайниках

Лишайники являются надежными индикаторами загрязнения воздуха и традиционно используются для целей биоиндикации. Основные причины, обусловливающие малую устойчивость лишайников и их группировок к атмосферному загрязнению следующие:

  1. высокая чувствительность водорослевого компонента лишайников, пигменты которого под действием загрязнителей быстро разрушаются;
  2. отсутствие защитных покровов и связанное с этим беспрепятственное поглощение газов слоевищами лишайников;
  3. строгие требования к кислотности субстрата, изменение которой сверх определенного предела влечет гибель лишайников.

При применении этого индикатора следует пользоваться шкалой устойчивости конкретного вида к загрязнителю. Шкала реакции лишайников на поллютанты ( для условий Северного Кавказа и Предкавказья), разработанная С.Б.Криворотовым (С.Б.Криворотов,1995), выделяет 4 типа этих организмов из 127 видов:

  • 1 тип - устойчивые к загрязнению лишайники (25);
  • 2 тип - чувствительные к действию атмосферного загрязнения (42);
  • 3 тип - очень чувствительные к загрязнению виды (23);
  • 4 тип - не переносящие загрязнения лишайники (37).

Лихенодиагностика позволяет осуществлять картирование территории по степени загрязненности атмосферного воздуха. Однако, возможности лихеноиндикации ограничены чувствительностью нативных видов (Б.Небель,1993), поскольку многие лишайники аккумулируя загрязнитель из атмосферы при его хроническом воздействии гибнут от низких концентраций, зачастую не достигающих установленнных для человека и теплокровных животных нормативов.

В условиях лаборатории, если лишайники поместить в камеры с определенной влажностью, температурой и концентрацией загрязнителя, то о степени повреждения биотеста принято судить по изменениям его структуры: визуально (цвет, морфология, образование диаспор) и микроскопическим (жизнеспособность водорослевого слоя). Флюоресцентная микроскопия позволяет оценить разрушение хлорофилла в клетках фотобионта; электронная микроскопия регистрирует такие ультраструктурные изменения водорослевых и грибных клеток, как увеличение плотности цитоплазмы и разрушение органелл (И.А.Шапиро,1996).

Биотесты на высших растениях

Для биотестирования отработано немало методов на различных культурах: белой горчице(Sinapis alba L.), озимой и яровой пшенице(Triticum aestivum L.), овсе(Avena L.), гречихе (Fagopyrum L.), огурце(Cucumis L.), кресс-салате(Lepidium sativum L.), сое (Glycine L.), льне (Linum L.), ежи сборной (Dactylis glomerata L.) (В.А.Зинченко,1972; Использование метода биоиндик.,1990; Ю.Роля и др.,1975; П.К. Солдатов и др., 1998; В.И.Шершунова, 1993, 1995).

На горчице учитывают степень ингибирования первичного корешка проростка после обработки семян противодвудольным гербицидом. Определяют также увядание растений, торможение прироста листьев надземной массы проростков.

Овес и рис используют как индикаторы почвенных противозлаковых гербицидов, так как это наиболее чувствительные виды среди злаковых культур. При этом основным тестом является ингибирование роста зародышевого корня и листа.

Редис является традиционным биотестом при исследовании остатков пестицидов в почве и конечной продукции растениеводства, т.к. обладает по сравнению с другими объектами как наиболее высокой чувствительностью к фитотоксичным препаратам, что обусловлено высокой энергией прорастания его семян и скороспелостью культуры (Н.П.Дубинин, Ю.В.Пашин, 1978).

На огурце и гречихе тестируют гербициды - производные мочевины и фенилкарбаматы. При этом у огурца учитывают рост первичного корня, у гречихи - утолщение стебля, деформацию зародышевых листьев, а также торможение роста. Кресс-салат используется как тест - объект для оценки загрязнения воздуха и почвы. Тест длится 10 дней. При наличии вредных веществ снижается процент всхожести и ингибируется рост зародышевых корешков. К недостаткам данного теста можно отнести неспецифичные изменения, затрудняющие выявление конкретного загрязнителя. Очевидно, это объясняется наличием генетической неоднородности культуры (Биоиндик. загряз...,1988).

Действие пестицидов на злаках обнаруживается по их влиянию на морфогенез растений, проявляющейся в изменениях типа морфозов. У озимой пшеницы, при высокой пестицидной нагрузке (2,4Д), диален, лонтрел, тилт, байлетон, метафос) наиболее распространенным и устойчивым типом морфоза является "мутовка", т.е. увеличение числа колосков на уступе колосового стержня. Внесение минеральных удобрений может также прямо или косвенно приводить к появлению морфозов колоса у озимой пшеницы ( в пределах 7% -39% в зависимости от гидротермического режима и вида удобрений). Колосовые морфозы и фазовый индекс, характеризуя интенсивность воздействия на растение агрохимикатов и других повреждающих факторов, могут быть успешно использованы в качестве диагностической тест- системы (И.Ф.Лапочкина и др.,1995; С.О.Ушкалова, 1993; В.И.Дорожкин, Л.Е.Бояринцев, 1995; В.И.Танский и др., 1998).

Видимо, успешное решение проблем биоиндикации во многом будет определяться подбором, а иногда и направленным созданием сортов(линий) культурных растений, чувствительных к загрязнению. К сожалению, в настоящее время подобные сорта и линии в России отсутствуют. Поэтому усилия исследователей должны быть направлены на поиск перспективных форм и работу с ними. Так, в Англии, специально выведен сорт табака Bel W3, характеризующийся восприимчивостью к содержанию озона в воздухе. C помощью этого сорта была создана картосхема Британских островов, характеризующая их загрязнение озоном. При слабом воздействии озона на табак через несколько дней по всей поверхности листовой пластинки образуется густая сеть некротических пятен серебристого цвета. В качестве эталона сравнения одновременно высаживается относительно устойчивый к озону сорт табака Bel B (W.J.Manming, W.A.Feder,1980; S.Schiele and et.al.,1981).

Успешное применение находят дикорастущие фитотесты в частности из семейства рясковых. Рясковые - самые мелкие цветковые растения, при благоприятных условиях размножаются круглогодично (преимущественно вегетативно). Интенсивность фототаксиса хлоропластов в листецах ряски, оцениваемая по изменению количества хлоропластов в эпистрофном положении, можно рассматривать как чувствительный показатель, свидетельствующий о степени загрязнения элементов агроландшафта. Явление отрицательного фототаксиса и послужило основой метода фитотестирования (А.Г.Ломагин, Л.В.Ульянова,1993). Благодаря этим преимуществам ряску можно назвать ''экологической дрозофилой''. Ряска малая (Lemna minor L.) и ряска тройчатая (Lemna trisulcs L.), чувствительны к загрязнению воды, при содержании в ней до 10 мкг/мл ионов Ba, Cu, Mg, Fe, Co (С.Г.Галактионов, В.М.Юдин, 1980). На каждый загрязнитель у видов рясок проявляется специфическая реакция. На медь (0,1- 0,.25 мг/мл) - листецы реагируют полным рассоединением из групп и изменением окраски с зеленой на голубую; реакция проявляется через 4 часа после воздействия. На цинк (0,025мг/мл) реакция заключается в изменении окраски листеца : с насыщенно зеленой до бесцветной; где зелеными остаются только точки роста; барий(0,1-0,25 мг/мл) вызывает полное рассоединение листецов, отпадание корней и изменение окраски с зеленой на молочно-белую; кобальт (0,25-0,0025 мг/мл) - полную приостановку роста и потерю окраски (Н.Г.Малюга и др.,1996).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При проведении биотестирования мы пытаемся оценить характеристику процесса, который по своей природе является вероятностным независимо от того, идет ли речь о действии отдельных факторов либо о суммарном загрязнении среды. Приведенный обзор исследований затрагивает лишь некоторые вопросы тестирования компонентов агроценоза, но не полный их спектр. Остается надеяться, что уже наработанные подходы позволят подойти к решению рассматриваемой проблемы с новых позиций.

Главная       Методики биотестирования Реакция на соли тяжелых металлов
Краснодар, 2000